教你成為平淡無奇的WB小能手-結(jié)尾篇

更新時(shí)間：2021-05-11

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大家好，小編又又又來了。今天是WB最后一步了，抗體孵育到顯影過程。

一抗孵育

◆ 封閉結(jié)束前20min準(zhǔn)備和所需一抗數(shù)量相等的孵育盒，在孵育盒上用記號(hào)筆標(biāo)注出抗體編號(hào)及所需稀釋比。按照規(guī)定的稀釋比例進(jìn)行抗體稀釋。稀釋比例建議預(yù)實(shí)驗(yàn)提前摸索或者根據(jù)抗體說明書上建議。

◆ 封閉時(shí)間結(jié)束之后，倒掉封閉液，將稀釋好的抗體加入到槽內(nèi)，將搖床放入4℃展示柜孵育過夜。

◆ 第二天將搖床搬出，平衡室溫?fù)u15min，倒掉一抗工作液，加入5mL TBST潤(rùn)洗膜一次，倒掉，加新的TBST洗膜5min，倒掉TBST，重復(fù)5次，此過程在搖床上進(jìn)行。

二抗孵育

◆ 在洗膜的過程中稀釋二抗，確定好一抗的物種來源，選擇相應(yīng)的二抗進(jìn)行稀釋，稀釋液為1xTBST。

◆ 洗膜結(jié)束，倒掉TBST，盡量使孵育盒內(nèi)無殘留液體。然后加入二抗稀釋液，孵育60min，此過程在搖床上進(jìn)行。

◆ 二抗孵育60min后，加入5mL TBST洗膜，“SPEED”檔位調(diào)到50-60，洗膜5min，倒掉TBST，重復(fù)5次。

顯影

按照膜的大小，配置ECL發(fā)光液體積，將發(fā)光液放在PE手套上，充分混勻。將膜從孵育盒中夾出，用紙沾干，放入發(fā)光液中5秒后用紙沾干，放入成像儀中曝光成像。

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產(chǎn)品貨號(hào)	產(chǎn)品名稱
P0012	10×麗春紅
SW3010	膜封閉液
A1800	抗體稀釋液
A1810	一抗稀釋液
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A1830	AP標(biāo)記抗體稀釋液
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SW2020	Western blotting (兔IgG)ECL顯色試劑盒
SW2030	Western blotting (山羊IgG)ECL顯色試劑盒
SW2040	Western blotting (小鼠/兔IgG) ECL顯色試劑盒

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