ELISA試劑盒樣本處理及要求

更新時(shí)間：2013-09-09

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　ELISA試劑盒產(chǎn)品的優(yōu)劣主要是從其特異性，準(zhǔn)確性，度等幾個(gè)方面進(jìn)行判斷.由于篇幅關(guān)系，現(xiàn)對(duì)產(chǎn)品特異性進(jìn)行詳細(xì)講解：

　特異性指的是在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，專一性地?cái)U(kuò)增目的片段而非其他片段的性能。在PCR實(shí)驗(yàn)本身的靈敏度很高，且實(shí)驗(yàn)條件未充分優(yōu)化的情況，通常會(huì)在目的片段出現(xiàn)的同時(shí)伴隨有其他的雜帶，即發(fā)生非特異性擴(kuò)增的現(xiàn)象。模板、引物性質(zhì)及質(zhì)量、反應(yīng)條件的控制等均會(huì)影響PCR擴(kuò)增的特異性。近年來(lái)的研究結(jié)果表明，緩沖液的品質(zhì)（如離子種類與組成，反應(yīng)優(yōu)化劑等）對(duì)保證PCR的特異性擴(kuò) 增起著不可忽視的作用。一般的緩沖液中調(diào)節(jié)氫鍵作用的鹽只有KCl，而東盛HSTM TaqMix的緩沖體系通過(guò)反應(yīng)優(yōu)化劑以及KCl/（NH4）S

PCR實(shí)驗(yàn)的靈敏度與特異性是一對(duì)此長(zhǎng)彼消的特性，這也決定我們實(shí)驗(yàn)體系調(diào)節(jié)實(shí)際就是找到適合實(shí)驗(yàn)的靈敏度與特異性的平衡點(diǎn)。由于PCR體系中的眾多成分，使得組合較多，篩選工作繁雜。東盛基于靈敏度與特異性分別設(shè)計(jì)了PCR Mix和HS Taq Mix，幫您確定大的平衡點(diǎn)，如果您需要更細(xì)致的平衡點(diǎn)，請(qǐng)選擇相應(yīng)的Mix Kit系列進(jìn)行微調(diào)。

ELISA操作實(shí)驗(yàn)中的樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無(wú)菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí)，用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量。加進(jìn)一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加進(jìn)一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

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