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MTT實驗原理

更新時間:2016-05-06點擊次數(shù):2928

MTT是一種檢測細胞存活和生長的方法。MTT實驗原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲瓚(Formazan)并沉積在細胞中,而死細胞無此功能。二甲基亞砜(DMSO)能溶解細胞中的甲瓚,用酶聯(lián)免疫檢測儀在490nm波長處測定其光吸收值,可間接反映活細胞數(shù)量。
在一定細胞數(shù)范圍內(nèi),MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值(OD值),來判斷活細胞數(shù)量,OD值越大,細胞活性越強(如果是測藥物毒性,則表示藥物毒性越小)。該方法已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細胞毒性試驗以及腫瘤放射敏感性測定等。它的特點是靈敏度高、經(jīng)濟。
MTT通常用于.細胞增殖及細胞活性測定以及藥物(也包括其他處理方式如放射線照射)對體外培養(yǎng)的細胞毒性的測定。
缺點:由于MTT經(jīng)還原所產(chǎn)生的甲瓚產(chǎn)物不溶于水,需被溶解后才能檢測。這不僅使工作量增加,也會對實驗結(jié)果的準確性產(chǎn)生影響,而且溶解甲的有機溶劑對實驗者也有損害。
注意事項:
1、在配制和保存的過程中,容器好用鋁箔紙包住。
2、配成的MTT需要無菌,MTT對菌很敏感
3、MTT一般好現(xiàn)用現(xiàn)配,過濾后4度避光保存兩周內(nèi)(個人曾做過4度避光保存4周的MTT溶液,效果仍然不錯)有效,或配制成5mg/ml保存在-20度長期保存,避免反復凍融,好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。當MTT變?yōu)榛揖G色時就不能再用。
4、MTT有致癌性,用的時候小心,有條件好帶那種透明的簿膜手套.
通常,此法中的MTT濃度為5mg/ml。因此,可以稱取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸緩沖液(PBS)或無酚紅的培養(yǎng)基中,用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的過程中,容器好用鋁箔紙包住

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