儲(chǔ)存條件
-20℃
莽草酸脫氫酶活性檢測(cè)試劑盒微量法
有效期
6個(gè)月
單位
盒
推薦
若使用96孔板測(cè)定，需使用96孔UV板，推薦貨號(hào)YA0602
英文名稱(chēng)
Shikimic acid Dehydrogenase(SD) Activity Assay Kit
檢測(cè)方法
微量法 Spectrophotometer/Microplate Reader
規(guī)格
100T/96S

產(chǎn)品型號(hào)：BC4185-100T/96S

更新時(shí)間：2024-04-12

廠(chǎng)商性質(zhì)：生產(chǎn)廠(chǎng)家

訪(fǎng) 問(wèn) 量：919

服務(wù)熱線(xiàn)

010-50973130

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產(chǎn)品分類(lèi)

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測(cè)試劑盒-微量法

水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測(cè)盒微量法生化試劑盒

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產(chǎn)品介紹

莽草酸脫氫酶（SD）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
貨號(hào): BC4185
規(guī)格: 100T/96S
產(chǎn)品組成：使用前請(qǐng)認(rèn)真核對(duì)試劑體積與瓶?jī)?nèi)體積是否一致，有疑問(wèn)請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱(chēng)	規(guī)格	保存條件
提取液	液體100 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	粉劑×1瓶	2-8℃保存
試劑三	粉劑×1瓶	-20℃保存

溶液的配制：

提取液：內(nèi)含不溶物，用前搖勻。
試劑二：臨用前加入5 mL蒸餾水溶解。
試劑三：臨用前每瓶加入10 mL蒸餾水溶解。
工作液的配制：根據(jù)用量按照試劑一：試劑二：試劑三為7:4:8的體積比例充分混勻，備用，用前25℃預(yù)熱15min。

產(chǎn)品說(shuō)明：
莽草酸途徑是存在于植物和微生物中的一條重要的代謝途徑，莽草酸脫氫酶(EC 1.1.1.25) 是莽草酸合成代謝途徑中催化第四步反應(yīng)的關(guān)鍵酶。
莽草酸脫氫酶催化莽草酸和NADP產(chǎn)生NADPH，檢測(cè)340nm下的吸光值增加速率來(lái)表示SD活性。
注意：實(shí)驗(yàn)之前建議選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)。如果樣本吸光值不在測(cè)量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測(cè)。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量石英比色皿/96孔UV板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測(cè)樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL提取液（加入前搖勻））進(jìn)行冰浴勻漿，然后，8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
2、細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（10⁴個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后8000g，4℃，離心10min，取上清置于冰上待測(cè)。
3、液體：直接檢測(cè)。
二、測(cè)定步驟

紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，紫外分光光度計(jì)蒸餾水調(diào)零。
工作液25℃預(yù)熱10min以上。
操作表：在微量石英比色皿/96孔UV板中分別加入下列試劑：

試劑名稱(chēng)	空白管	測(cè)定管
工作液（µL）	190	190
樣本（µL）		10
蒸餾水（µL）	10
加入樣本即開(kāi)始計(jì)時(shí)，充分混勻后于340nm處測(cè)定20s時(shí)的吸光值A1和5min20s時(shí)的吸光值A2，計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定，ΔA空白管=A2空白-A1空白，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管（空白管只需做1-2次）。

三、SD酶活計(jì)算
A、按微量石英比色皿計(jì)算：

按蛋白濃度計(jì)算

酶活定義：每毫克蛋白每分鐘產(chǎn)生 1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
SD酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣×Cpr）÷T=643×ΔA÷Cpr

按樣本質(zhì)量計(jì)算

酶活定義：每克樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
SD酶活（U/g 質(zhì)量）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T=643×ΔA÷W

按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算

酶活定義：每10⁴個(gè)細(xì)胞每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
SD酶活（U/10⁴ cell）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷（V樣÷V樣總×細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)））÷T
=643×ΔA÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）

按液體體積計(jì)算

酶活定義：每mL液體樣本每分鐘產(chǎn)生1nmol的NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
SD酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反總÷V樣÷T=643×ΔA
ε：NADPH摩爾消光系數(shù)，6.22×10³L/mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10^-4L；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.01mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，5min；10⁹：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1mol=10⁹nmol；V樣總：加入提取液體積，1mL。
B、按96孔UV板計(jì)算：
將上述公式中的d-1cm改為d-0.6cm（96孔板光徑）進(jìn)行計(jì)算即可。

注意事項(xiàng)：

樣本提取上清液置于冰上待測(cè)，且樣本提取完成后建議2h內(nèi)測(cè)完。
樣本的蛋白濃度需自行測(cè)定，由于提取液中含有一定濃度的蛋白（約1 mg/mL），所以測(cè)定樣本蛋白濃度時(shí)需扣除提取液自身蛋白濃度。
ΔA大于1時(shí)，建議將樣本稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。當(dāng)ΔA小于0.01時(shí)，可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間（10min或15min）來(lái)測(cè)定。
空白管為檢測(cè)各試劑組分質(zhì)量的檢測(cè)孔，正常情況下，變化不超過(guò)0.01。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

取0.1g稗草，加入1mL提取液，進(jìn)行樣本處理，取上清按照測(cè)得步驟操作，用微量石英比色皿測(cè)得計(jì)算ΔA測(cè)定管=A2測(cè)定-A1測(cè)定=0.2771-0.2433=0.0338，ΔA空白管=A2空白-A1空白=0，ΔA=ΔA測(cè)定管-ΔA空白管=0.0338，按照樣本質(zhì)量計(jì)算得：SD酶活（U/g 質(zhì)量）=643×ΔA÷W=217.334 U/g 質(zhì)量。