過氧化物酶（POD）生化檢測試劑盒抗逆系列
檢測方法可見分光光度法
POD廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。
試驗中所需的儀器和試劑：可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

產(chǎn)品型號：BC0090-50管/48樣

更新時間：2024-04-03

廠商性質(zhì)：生產(chǎn)廠家

訪問量：2849

服務(wù)熱線

010-50973130

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產(chǎn)品分類

PRODUCT CLASSIFICATION

生化檢測試劑盒-常量法

谷胱甘肽過氧化物酶4（GPX4）活性檢測總谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px/GPX）活性檢測 α-L-巖藻糖苷酶（AFU）活性檢測硫代葡萄糖苷含量檢測生物堿含量檢測總氧化狀態(tài)（TOS）檢測 α-基丁酸脫氫酶（α－HBDH）活性檢測 3-磷酸甘油酯酶（GPP）活性檢測水溶性物質(zhì)羥自由基清除能力檢測植物銨態(tài)氮含量檢測試劑盒血清（漿）二胺氧化酶（DAO）活性檢測試劑盒細(xì)胞酸性磷酸酶細(xì)胞堿性磷酸酶果膠系列轉(zhuǎn)氫酶系列光合作用系列維生素系列糖原系列糖異生系列蛋白含量測定系列其它系列信號系列土壤系列離子系列 P450系列糖代謝系列蔗糖系列淀粉系列脂肪酸代謝系列蛋白酶系列糖酵解系列三羧酸循環(huán)系列線粒體呼吸鏈系列酯酶系列氨基酸代謝系列氮代謝系列 ATP系列抗逆系列抗氧系列氧化系列維生素C代謝系列谷胱甘肽系列輔酶Ⅱ系列輔酶Ⅰ系列

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產(chǎn)品介紹

過氧化物酶（POD）活性檢測試劑盒說明書
可見分光光度法
注意：本產(chǎn)品試劑有所變動，請注意并嚴(yán)格按照該說明書操作。
貨號：BC0090
規(guī)格：50T/48S
產(chǎn)品組成：使用前請認(rèn)真核對試劑體積與瓶內(nèi)體積是否一致，有疑問請及時聯(lián)系索萊寶工作人員。

試劑名稱	規(guī)格	保存條件
提取液	液體60 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑一	液體40 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑二	液體0.04 mL×1瓶	2-8℃保存
試劑三	液體10 mL×1瓶	2-8℃保存

溶液的配制：

試劑二：液體置于試劑瓶內(nèi)EP管中，使用前需先離心。取0.01 mL試劑二加入3.2mL試劑一混合備用（約24T），現(xiàn)配現(xiàn)用，也可根據(jù)樣本量按比例配制。

產(chǎn)品說明：
POD（EC 1.11.1.7）廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物，具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD催化H₂O₂氧化特定底物，在470nm有特征光吸收。
注意：實驗之前建議選擇2-3個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內(nèi)建議稀釋或者增加樣本量進(jìn)行檢測。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器/細(xì)胞超聲破碎儀、冰和蒸餾水。
操作步驟：
一、樣本處理（可適當(dāng)調(diào)整待測樣本量，具體比例可以參考文獻(xiàn)）

細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣本的制備：

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

血清（漿）樣本：直接檢測。

二、測定步驟
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至470nm，蒸餾水調(diào)零。
2、測定前將試劑一、二和三37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）放置10min。
3、樣本測定表：

試劑名稱（µL）	測定管
樣本	15
蒸餾水	270
試劑一	520
試劑二	130
試劑三	135

在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑，立即混勻并計時，記錄470nm下30s時的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。計算ΔA=A2-A1。
三、POD活性計算

血清（漿）POD活性

單位定義：每mL血清（漿）在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/mL）=ΔA×V反總÷V樣÷0.01÷T =7133×ΔA

組織、細(xì)菌或細(xì)胞POD活性

按樣本蛋白濃度計算

單位定義：每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/mg prot）=ΔA×V反總÷（V樣×Cpr）÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

按樣本質(zhì)量計算

單位定義：每g組織在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/g 質(zhì)量）=ΔA×V反總÷(W× V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計算

單位定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。
POD（U/10⁴cell）=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =14.27×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，1.07mL；V樣：加入樣本體積，0.015mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，1min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
注意事項：

若一次性測定樣本較多，可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液，在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）放置10min以上，測定時加入15µL樣本和1055µL混合液測定。
如果ΔA小于0.005，可將反應(yīng)時間延長到5min。如果ΔA大于0.5或者反應(yīng)液中有較多氣泡產(chǎn)生，可將樣本用提取液稀釋后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。

實驗實例：
取0.1043g大鼠心臟加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，用提取液稀釋2倍后按照測定步驟操作，用玻璃比色皿測定并計算ΔA=A2-A1=0.363-0.134=0.229。按樣本質(zhì)量計算含量得：
POD（U/g 質(zhì)量）=7133×ΔA÷W×2（稀釋倍數(shù)）=3.132×10⁴ U/g 質(zhì)量。
取0.1049g黃楊葉片，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清置冰上，按照測定步驟操作，用玻璃比色皿測定并計算ΔA=A2-A1=0.549-0.11=0.439。按樣本質(zhì)量計算含量得：
POD（U/g 質(zhì)量）=7133×ΔA÷W=2.985×10⁴ U/g 質(zhì)量

相關(guān)發(fā)表文獻(xiàn)：

Yin Y J, Chen C J, Guo S W, et al. The fight against Panax notoginseng root-rot disease using zingiberaceae essential oils as potential weapons[J]. Frontiers in plant science, 2018, 9: 1346.
Dou S, Liu S, Xu X, et al. Octanal inhibits spore germination of Penicillium digitatum involving membrane peroxidation[J]. Protoplasma, 2017, 254(4): 1539-1545.
Li B, Ding Y, Tang X, et al. Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)[J]. Food and Bioprocess Technology, 2019, 12(4): 563-574.
Yanan Wang,Chengzhen Liang,Zhigang Meng,et al. Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton. Environmental and Experimental Botany. June 2019;162:364-373.(IF3.712)
Yanjiao Yin,Chuanjiao Chen,Shiwei Guo,et al. The Fight Against Panax notoginseng Root-Rot Disease Using Zingiberaceae Essential Oils as Potential Weapons. Frontier in Immunology. October 2018;(IF4.716)

參考文獻(xiàn)：
[1] Reuveni R. Peroxidase Activity as a Biochemical Marker for Resistance of Muskmelon (Cucumis melo) to Pseudoperonospora cubensis[J]. Phytopathology, 1992, 82(7).
[2] Doerge D R, Divi R L, Churchwell M I. Identification of the Colored Guaiacol Oxidation Product Produced by Peroxidases[J]. Analytical Biochemistry, 1997, 250(1):10-17.
相關(guān)系列產(chǎn)品：
BC0190/BC0195 多酚氧化酶（PPO）活性檢測試劑盒
BC0210/BC0215 苯*解氨酶（PAL）活性檢測試劑盒
BC0170/BC0175 超氧化物歧化酶（SOD）活性檢測試劑盒
BC0200/BC0205 過氧化氫酶（CAT）活性檢測試劑盒

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