糖原D-PAS染色液(淀粉酶消化法)

貨號：G1282

規(guī)格：5×50ml/5×100ml

     糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一，McManus在1946年先使用高碘酸-雪夫技術(shù)顯示黏蛋白，該法常用來顯示糖原和其他多糖，該染色液不僅能夠顯示糖原，還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)，以及軟骨、垂體、霉菌、真菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。 
     過碘酸（又稱高碘酸）是一種強氧化劑，它能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的1，2-乙二醇基，使之變?yōu)槎┡cSchiff試劑能結(jié)合成一種品紅化合物，產(chǎn)生紫紅色。由于高碘酸還可氧化細胞內(nèi)其他物質(zhì)，使用時應(yīng)注意選擇好高碘酸濃度和氧化時間，使氧化控制在即能把乙二醇基氧化成醛基，又不于過氧化，這是很關(guān)鍵的步驟。 
     PAS技術(shù)是*可檢測不同種類的黏液物質(zhì)（如糖原、黏蛋白和糖蛋白）的方法，但PAS技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要準(zhǔn)確鑒別黏液物質(zhì)（如黏蛋白和糖原），需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情況下可用α-淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解。形成水溶性的雙糖-麥芽糖，在應(yīng)用PAS技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認為是消化糖原的一種有效手段，但是出于安全以及缺乏標(biāo)準(zhǔn)唾液的考慮，不主張應(yīng)用唾液。
     糖原D-PAS染色液的特點在于糖原PAS染色之前經(jīng)淀粉酶處理，糖原消化時需要兩張相同的切片，脫蠟后一張切片用含有淀粉酶的適當(dāng)緩沖液處理，另一張僅用緩沖液處理。然后兩張切片均用PAS法染色，消化后染色消失表明存在糖原。

產(chǎn)品說明：
糖原染色是病理學(xué)中常規(guī)的染色方法之一，McManus 在 1946 年使用 PAS 技術(shù)顯示黏蛋白，該法常用來顯示糖原和其他多糖，該染色液不僅能夠顯示糖原，還能顯示中性黏液性物質(zhì)和某些酸性物質(zhì)，以及軟骨、垂體、霉菌、真菌、色素、淀粉樣物質(zhì)、基底膜等。氧化劑能氧化糖類及有關(guān)物質(zhì)中的 1，2-乙二醇基，使之變?yōu)槎┡c Schiff 試劑能結(jié)合成一種品紅化合物，產(chǎn)生紫紅色。由于氧化劑還可氧化細胞內(nèi)其他物質(zhì)，使用時應(yīng)注意選擇好氧化劑濃度和氧化時間，使氧化控制在即能把乙二醇基氧化成醛基，又不于過氧化，這是很關(guān)鍵的步驟。PAS 技術(shù)是可檢測不同種類的黏液物質(zhì)（如糖原、黏蛋白和糖蛋白）的方法，但 PAS 技術(shù)卻不能區(qū)別黏蛋白和糖原。若要準(zhǔn)確鑒別黏液物質(zhì)（如黏蛋白和糖原），需加入糖原消化步驟。大多數(shù)情況下可用α-淀粉酶或麥芽淀粉酶來催化糖原的糖苷鍵水解。形成水溶性的雙糖-麥芽糖，在應(yīng)用 PAS 技術(shù)之前將糖原從組織切片上除去。人類的唾液被認為是消化糖原的一種有效手段，但是出于安全以及缺乏標(biāo)準(zhǔn)唾液的考慮，不主張應(yīng)用唾液。糖原 D-PAS 染色液的特點在于糖原 PAS 染色之前經(jīng)淀粉酶處理，糖原消化時需要兩張相同的切片，脫蠟后一張切片用含有淀粉酶的適當(dāng)緩沖液處理，另一張僅用緩沖液處理。然后兩張切片均用 PAS 法染色，消化后染色消失表明存在糖原。

操作步驟（僅供參考）：
1、兩張相同切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇入水。
2、一張切片入淀粉酶溶液處理 20min。另一張不用淀粉酶溶液處理，入水 1h 作為對照。
3、流水沖洗兩張切片各 5～10min。
4、入氧化劑中，室溫（25-30℃）放置 5～8min，一般不宜超過 10min。
5、自來水沖洗 1 次，再用蒸餾水浸洗 2 次。
6、入 Schiff Reagent，置于室溫（25-30℃）陰暗處，浸染 10～20min。
7、自來水沖洗 10min。
8、入 Mayer 蘇木素染色液中，染細胞核 1～2min。
9、(可選)酸性分化液分化 2～5s。
10、自來水沖洗 10～15min 后，更換雙蒸水清洗，使其返藍。
11、 二甲苯透明，中性樹膠封固。

染色結(jié)果：
糖原、中性、唾液黏蛋白 紅紫色
各種糖蛋白 紅紫色
細胞核 藍色
未處理的切片，糖原呈亮紅色或紅紫色；淀粉酶處理的切片，糖原陰性。

注意事項：
1、 切片脫蠟應(yīng)盡量干凈，否則影響染色效果。
2、 需使用一張陽性對照片驗證酶的活性。
3、 氧化劑氧化時間不宜過久，氧化時的溫度以 18～22℃。
4、 試劑 A、試劑 B、試劑 C 應(yīng)置于 4℃密閉保存，使用時避免接觸過多的陽光和空氣。使用前，提前取出恢復(fù)到室溫，避光暗處使用。
5、 酸性分化液應(yīng)經(jīng)常更換新液，其分化時間應(yīng)該依據(jù)切片厚薄、組織的類別和酸性分化液的新舊而定，另外分化后自來水沖洗時間應(yīng)該足夠。
6、 在氧化劑和 Schiff Reagent 中作用時間非常重要，該依據(jù)切片厚薄、組織的類別等決定。
7、 冷凍切片染色時間盡量要短。
8、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關(guān)文獻：

《Liraglutide reduces hepatic glucolipotoxicity?induced liver cell apoptosis through NRF2 signaling in Zucker diabetic fatty rats》 作者:Jun Guo，Cai Li，Chunxiao Yang，Bing Li，Jie Wei，Yajun Lin，Peng Ye，Gang Hu，Jian Li 期刊:Molecular Medicine Reports 影響因子:1.851 PMID:29693190

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